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Fundación Ramón Areces

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Ciencias de la Vida y de la Materia

Caracterización del epítodo del autoantígeno en el síndrome Goodpasture mediante el uso de la técnica de phage display

Investigador Principal:
Jesús Rodríguez Díaz 

Centro de Investigación:
Instituto de Agroquímica y Tecnología de Alimentos (IATA). CSIC. Valencia.

Sinopsis:
Jesús RodríguezEl presente proyecto pretende llevar a cabo una caracterización profunda del epítopo del autoantígeno Goodpasture (GP) mediante la combinación de potentes técnicas poco utilizadas en nuestro entorno científico. Hasta el momento, para la consecución de este objetivo se ha llevado a cabo la producción de las formas recombinantes tanto de la cadena a3(IV) NC1 como de los 3 dominios no colagenosos a3(IV), a4(IV), a5(IV) de forma conjunta en el sistema de baculovirus produciendo así el antígeno GP para la caracterización de los anticuerpos circulantes y unidos a riñón de pacientes GP. La caracterización fina del epítopo se ha realizado mediante la combinación de mutagénesis dirigida α3(IV) NC1, la utilización de diferentes librerías péptidos tipo phage display y el análisis de las cinéticas de unión de los diferentes anticuerpos a los péptidos seleccionados y a los diferentes mutantes producidos mediante "Surface Plasmon Resonance" (SPR).
El segundo objetivo del proyecto ha sido estudiar el efecto de la proteína de unión al antígeno de Goodpasture (GPBP) en la hipótesis de diversificación conformacional. Ante la sospecha de que la proteína de unión al antígeno GP (GPBP) podría intervenir en la diversificación conformacional del dominio NCI-α3 y en la etiología de la enfermedad, se ha coexpresado, utilizando un mismo vector en células de insecto, el dominio NCI-α3 y la proteína GPBP. Luego, se ha analizado las diferencias entre este material y el dominio NCI-α3 obtenido en ausencia de GPBP. El estudio mediante SPR de complejos de ambas formas del dominio NCI-α3 con mAb3 ha revelado diferencias conformacionales entre ambas formas.

PRODUCCIÓN CIENTÍFICA

Artículos generados en Revistas 2
Comunicaciones en congresos nacionales 2
Comunicaciones en congresos internacionales 1
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Jesús Rodríguez Díaz 
Desde abril de 2001 hasta junio de 2005 desarrollé mi tesis doctoral en el Departamento de Microbiología de la Universidad de Valencia y en la División de Virología Molecular de la Universidad de Linköping (Suecia). El título de la tesis doctoral fue el "estudio sobre la inmunogenicidad y los mecanismos fisiopatológicos de la proteína NSP4 de rotavirus". El desarrollo de la misma dio lugar a cuatro publicaciones en revistas internacionales como primer autor  [Rodriguez-Diaz, J., et al. (2003) Protein Expr Purif 31, 207-12; Rodriguez-Diaz, J.,et al. (2004) J Virol Methods 121, 231-8; Rodriguez-Diaz, J., et al (2005) J Med Virol 77, 317-22; Rodriguez-Diaz, J., et al (2006) J Med Virol 78, 979-85.]


En este periodo de tiempo colaboré en el desarrollo de nuevas estrategias vacunales para conferir protección frente a las infecciones por rotavirus mediante el uso de vacunas de ADN así como el uso de bacterias lácticas probióticas para conferir inmunidad activa y pasiva (mediante la participación en el Proyecto Europeo: "Probiotic strains with designed health properties" (Deprohealth)) y el uso de levadura para conferir inmunidad activa  [Garcia-Diaz, A., et al (2004) Vaccine 23, 489-98; Monedero, V., et al. (2004) Appl Environ Microbiol 70, 6936-9; Andres, I. et al. (2006) Biotechnol Bioeng 93, 89-98.].


También colaboré en trabajos de epidemiología molecular de calicivirus mediante la participación en varios Proyectos Europeos: "Foodborne viruses in Europe: Rapid detection of transnational foodborne viral infections and elucidation of transmission routes through molecular tracing and development of a common database", Providing tools to prevent emergence of enteric viruses (EVENT)", y "Prevention of emerging (food-borne) enteric viral infections: diagnosis, viability testing, networking and epidemiology" (DIVINE-NET) [Buesa, J., et al. (2002) J Clin Microbiol 40, 2854-9.]


En el periodo de mi tesis transcurrido en la Universidad de Linköping en suecia colaboré en la caracterización del receptor celular de los calicivirus así como el estudio de los factores genéticos de los hospedadores responsables de la susceptibilidad a la infección por norovirus y en el desarrollo de estudios evolutivos en norovirus. [Larsson, M. M., et al. (2006) J. Infect Dis 194, 1422-7; Rydell, G. E., et al. (2009) Glycobiology 19, 309-20; Carlsson, B., et al. (2009) J Gen Virol 90, 432-41.]


Mi primer periodo postdoctoral fue en el Laboratorio de Neurobiología del Centro de Investigación Príncipe Felipe (CIPF). Durante este periodo colaboré el estudio de la bases moleculares del síndrome de hiperamonemia crónica (CHS) en el sistema nervioso central (CNS) [Rodrigo, R., et al. (2007) J Neurochem 102, 51-64.]. Posteriormente ocupé el cargo de Director Científico de la empresa de biotecnología Biosensores S.L. participando en el desarrollo un biosensor de afinidad automatizado basado en partículas magnéticas.


En agosto de 2007 me incorporé como investigador contratado en el Laboratorio de Biología de Virus del Centro de Microbiología y Biología Celular del Instituto Venezolano de Investigaciones Científicas (IVIC). Durante un año fui el científico responsable de dos líneas de investigación: microbiología ambiental y virología molecular de los calicivirus. [Rodriguez-Diaz, J., et al. (2008) J Virol Methods 149, 240-5; Rodriguez-Diaz, J., et al. (2009) Appl Environ Microbiol 75, 387-94].


De noviembre de 2008 a diciembre de 2009  trabajé como investigador contratado en el Laboratorio de Reconocimiento Molecular del CIPF. En este periodo comencé mis estudios sobre el autoantígeno del síndrome de Goodpaster que dio lugar a la solicitud del presente proyecto. Actualmente trabajo como investigador contratado por el Consejo Superior de Investigaciones Científicas (CSIC).
 


*Todos los derechos de propiedad intelectual son del autor. Queda prohibida la reproducción total o parcial de la obra sin autorización expresa del autor.
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