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Proyectos de investigación

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Papel de la señalización purinérgica en el desarrollo cortical humano: una aproximación basada en organoides cerebrales

XVIII Concurso Nacional para la Adjudicación de Ayudas a la Investigación en Ciencias de la Vida y de la Materia

Reprogramación tisular y organoides

Investigador Principal: María Teresa Miras-Portugal

Centro de investigación o Institución: Departamento de Bioquímica y Biología Molecular IV. Universidad Complutense. Madrid

Sinopsis

El objetivo fundamental de este proyecto se centra en investigar el papel de la señalización purinérgica en el desarrollo cortical humano y su implicación potencial en el diseño de futuras estrategias terapéuticas contra las malformaciones corticales. Para ello, planeamos utilizar las prometedoras posibilidades abiertas por el método de los organoides cerebrales para realizar un estudio fenotípico completo, así como para descubrir qué genes y vías de señalización están involucrados en el modelo cortical humano.

Concretamente, nuestros objetivos son caracterizar la expresión y función del sistema purinérgico durante el desarrollo cortical tanto a nivel de célula única, como a nivel del organoide completo; y mejorar el método de cultivo de organoides. 

En el primer año de investigación, nuestro grupo completó los siguientes objetivos: i) Mejora y consolidación del cultivo de organoides. ii) Análisis de la expresión de los receptores purinérgicos y el transportador vesicular de nucleótidos por inmunohistoquímica y por mRNA tanto en los dominios neuronales como de progenitores neurales en la corteza en desarrollo. iii) Análisis de los niveles de mRNA durante la formación de los organoides (hiPSCs, Embryonic Bodies…) iv) Experimentos preliminares de electroporación de los organoides con vectores de sobreexpresión y silenciamiento del P2X7.

En el último año, continuamos la optimización del método incluyendo el establecimiento del modelo de cultivo 2D que permite un análisis en detalle de la funcionalidad del sistema purinérgico a lo largo de la formación de los organoides. Realizamos análisis de la expresión del sistema purinérgico (receptores y VNUT) a nivel de proteína en los organoides en formación. Hemos comenzado el análisis funcional de los receptores purinérgicos por imagen de calcio y electrofisiología. Hemos iniciado un cultivo de organoides en presencia/ausencia de agonistas y antagonistas purinérgicos para evaluar el impacto de la señalización purinérgica en su formación.

Finalmente, hemos continuado con el análisis de los experimentos de electroporación.

 

Producción Científica
 
Artículos generados en Revistas 11
Comunicaciones en Congresos Nacionales 21
Comunicaciones en Congresos Internacionales 21

 

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