Proyectos de investigación

Este proyecto de investigación tiene dos grandes objetivos:

1.- Estudiar la activación de la inmunidad innata en cultivos celulares deficientes en disferlina. Hemos desarrollado un protocolo para diferenciar la línea TE671 y caracterizar los miotubos resultantes. Con este método, la línea TE671 resultará de gran utilidad como alternativa al uso de células musculares humanas primarias para chequeo de medicamentos y/o investigación básica. Hemos creado un modelo celular/muscular para disferlinopatías con las mutaciones siguientes en el exón 29 del gen DYSF: c.3103_3112del, c.3112dup, c.3147T>G y c.3150C>G (secuencia de referencia NM_3494.3), que reproduce las propiedades observadas en los cultivos primarios de pacientes con disferlinopatía: como reducción de miogenina, incremento de TSP-1 y reparación de membrana deficiente.

2.- Evaluar la eficacia de diferentes tratamientos en cultivos celulares.

2.1.- Terapia farmacológica: El tratamiento de los miotubos deficientes en disferlina con inhibidores del proteasoma conjuntamente con el análogo de la vitamina D3 (EB1089), produce un ligero aumento de disferlina y miogenina, así como una disminución en la secreción de trombospondina-1. Los diferentes tratamientos no mostraron ningún efecto en la reparación del músculo esquelético después de un daño. Estos hallazgos indican que el sistema ubiquitina-proteasoma no es el mecanismo principal de la degradación de disferlina mutante. De todos modos, la inhibición del proteasoma podría mejorar la inflamación del músculo deficiente en disferlina, reduciendo la secreción de trombospondina-1.

2.2.- Análisis TLR4: Los mioblastos deficientes en disferlina presentan unos niveles de TLR4 más elevados que los miotubos control. Los mensajeros secundarios de las vías activadas por TLR4 también están incrementadas en estas células. El tratamiento con Atorvastatina no reduce los niveles de TLR4, ni los mensajeros inflamatorios secundarios, pero sí incrementa los niveles de disferlina. En la actualidad, estamos testando otros inhibidores de TLR-4, para interferir en la activación de las vías de señalización de la inflamación, constitutivamente activadas en las células deficientes en disferlina.