Proyectos de investigación

Alteraciones del epitelio pigmentado de la retina (RPE) llevan frecuentemente a pérdida de visión. El reemplazo de estas células es, por tanto, una estrategia terapéutica prometedora, aunque diversos obstáculos técnicos dificultan su obtención. Uno de ello es el escaso conocimiento de las redes genéticas reguladoras (GRN) involucradas en la especificación y mantenimiento del RPE. Para llenar este vacío conceptual, hemos aplicado en pez cebra análisis genómicos comparativos, RNAseq y ATACseq, tanto para progenitores no especificados como para los dominios de retina neural (NR) y RPE. Con esta estrategia, hemos identificado grupos de factores de transcripción, que marcan los estados transcripcionales del RPE y NR a lo largo del tiempo. 

Un primer grupo actúa muy tempranamente promoviendo la especificación inicial. Un segundo sostiene la adquisición de la identidad principal de los dos tejidos. La identificación de regiones de cromatina diferencialmente abiertas entre los dos tejidos apoya este proceso diferencial y escalonado y muestra además que el RPE es más activo transcripcionalmente que la NR. Nuestros datos permiten proponer que la identidad de NR se configura más fácilmente al "restringir" el destino de los progenitores no comprometidos con adaptaciones menores de la GRN del campo morfogenético del ojo. Por el contrario, la adquisición de la identidad de RPE requiere cambios transcriptómicos y epigenómicos más dramáticos para "modificar" el destino celular. También observamos que los programas de desarrollo de NR y RPE son mutuamente excluyentes, con grupos de factores de transcripción ejerciendo represión cruzada. Mediante mutagénesis CRISPR/Cas9 para genes seleccionados hemos validado algunos de los transcriptos identificados y el modelo propuesto. En paralelo hemos usado una línea transgénica que nos permite identificar las células del RPE desde su inicio, demostrando que la transición del RPE desde neuroepitelio a epitelio escamoso es necesaria para la morfogénesis de la vesícula óptica. Los resultados obtenidos permitirán elaborar mejores protocolos para la obtención de celular RPE apta para uso terapéutico.