Proyectos de investigación

Diseñar un Sistema Basado en Proteínas CRISPR para Dirigir el Metabolismo de Paracoccus denitrificans. Los principales resultados obtenidos desde el informe anterior se resumen a continuación.

RESULTADOS:

• Obtención del plásmido ProgStrain: Este plásmido codifica para un sistema ortogonal de proteínas Cas para sobreexpresar el gen de la lactato-deshidrogenasa y reprimir el gen de la piruvato deshidrogenasa. Se ha introducido el plásmido en Escherichia coli para su conservación, modificación y producción.

• Elaboración de los procedimientos para la extracción de RNA de Paracoccus denitrificans y su uso para RT-qPCR: Se ha elaborado un protocolo de extracción de RNA a partir de un cultivo líquido de Paracoccus denitrificans, con un rendimiento de al menos 200 ng/microL, y de tratamiento con DNasaI para eliminar posibles contaminaciones de DNA.

• Optimización de los protocolos de RT-qPCR: Se han optimizado los parámetros de la RT-qPCR y las cantidades a utilizar de las tres parejas de primers escogidas, las de los genes lactato deshidrogenasa y piruvato deshidrogenasa cuya expresión se evaluará, y la del gen de la subunidad β de la RNA polimerasa como gen de referencia para el análisis cuantitativo. Y se ha calculado la eficiencia de las tres parejas de primers, necesario para el posterior análisis cuantitativo. En las gráficas mostradas abajo se observa el aspecto típico de las curvas de qPCR.