Proyectos de investigación

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Caracterización del epítodo del autoantígeno en el síndrome Goodpasture mediante el uso de la técnica de phage display

XV Concurso Nacional para la adjudicación de Ayudas a la Investigación en Ciencias de la Vida y de la Materia

Enfermedades raras

Investigador Principal: Jesús Rodríguez Díaz

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Centro de investigación o Institución: Instituto de Agroquímica y Tecnología de Alimentos (IATA). CSIC.

Sinopsis

El presente proyecto pretende llevar a cabo una caracterización profunda del epítopo del autoantígeno Goodpasture (GP) mediante la combinación de potentes técnicas poco utilizadas en nuestro entorno científico. Hasta el momento, para la consecución de este objetivo se ha llevado a cabo la producción de las formas recombinantes tanto de la cadena a3(IV) NC1 como de los 3 dominios no colagenosos a3(IV), a4(IV), a5(IV) de forma conjunta en el sistema de baculovirus produciendo así el antígeno GP para la caracterización de los anticuerpos circulantes y unidos a riñón de pacientes GP. La caracterización fina del epítopo se ha realizado mediante la combinación de mutagénesis dirigida α3(IV) NC1, la utilización de diferentes librerías péptidos tipo phage display y el análisis de las cinéticas de unión de los diferentes anticuerpos a los péptidos seleccionados y a los diferentes mutantes producidos mediante "Surface Plasmon Resonance" (SPR).
El segundo objetivo del proyecto ha sido estudiar el efecto de la proteína de unión al antígeno de Goodpasture (GPBP) en la hipótesis de diversificación conformacional. Ante la sospecha de que la proteína de unión al antígeno GP (GPBP) podría intervenir en la diversificación conformacional del dominio NCI-α3 y en la etiología de la enfermedad, se ha coexpresado, utilizando un mismo vector en células de insecto, el dominio NCI-α3 y la proteína GPBP. Luego, se ha analizado las diferencias entre este material y el dominio NCI-α3 obtenido en ausencia de GPBP. El estudio mediante SPR de complejos de ambas formas del dominio NCI-α3 con mAb3 ha revelado diferencias conformacionales entre ambas formas.