Proyectos de investigación

Los exosomas son nano-vesículas de 30-100 nm compuestas de una bicapa lipídica y generados por endocitosis de segmentos de la membrana plasmática. En la presente propuesta hipotetizamos que los exosomas derivados de infecciones causadas por tres enfermedades humanas parasitarias desatendidas, la malaria vivax, la enfermedad de Chagas y la fascioliasis, actúen como intercomunicadores celulares facilitando el establecimiento de infecciones. Más aún, que las proteínas parasitarias que componen estos exosomas identificarán nuevos antígenos útiles para la generación de vacunas, y que el uso de exosomas derivados de reticulocitos servirá como una nueva plataforma de nanovacunas contra dichas parasitosis.

En los primeros seis meses nos hemos concentrado en optimizar la metodología para descubrir los antígenos parasitarios asociados a exosomas presentes en plasma de cada una de las especies. Primero, definimos los protocolos de extracción de muestras y su procesamiento. Optamos por la cromatografía de exclusión molecular ya que permite eluir fracciones puras de exosomas, libres de proteínas plasmáticas abundantes que pudieran enmascarar proteínas poco comunes. Siguiendo esta metodología, se realizó un estudio piloto con tres muestras por parásito siguiendo el protocolo habitual de proteómica seguido hasta ese momento. Después de varias modificaciones, como el uso de más de una enzima para la digestión, conseguimos multiplicar el número de proteínas identificadas.

Asimismo, se han comparado distintos equipamientos y tiempos de cromatografía. Con el espectrómetro de masas Thermo LTQ Orbitrap Velos Pro y un aumento en 30 minutos se ha conseguido multiplicar por 5 el número de proteínas identificadas. Con la utilización del espectrómetro de masas de última generación Thermo Orbitrap Fusion (con el único ejemplar disponible en Europa, en concreto en el CRG, Barcelona), se ha conseguido multiplicar por 8 el número de proteínas identificadas.

En la actualidad, y siguiendo con el cronograma previsto, se está procediendo al procesado de 50 muestras y la identificación inequívoca de proteínas asociadas a exosomas de plasma.