Proyectos de investigación

Objetivo 1

Análisis de la distribución espacio-temporal de las distintas isoformas de la proteína Hth, así como sus distintas funciones durante el desarrollo. Haciendo uso de las deficiencias generadas en el laboratorio, se han llevado a cabo dos tipos de experimentos. Por un lado, experimentos de qRT-PCR para analizar las cantidades relativas de cada tipo de isoforma presente en las deficiencias. Por otro lado, se han introducido una a una las distintas isoformas en las deficiencias y se ha analizado su capacidad para rescatar el fenotipo larvario. Los resultados de estos experimentos indican que existe una regulación cruzada entre las diferentes isoformas que las estabiliza entre sí. Si se intenta introducir cualquiera de las isoformas en un fondo mutante para todas ellas, ésta se desestabiliza y no funciona. Además, se ha constatado que las isoformas se expresan a muy diferentes niveles en los embriones silvestres, y que eliminada cualquiera de ellas varían las cantidades relativas de las otras. Por otro lado, se han generado anticuerpos específicos contra tres tipos de isoformas: dos isoformas cortas y una larga. Uno de los anticuerpos contra una de las isoformas cortas no da señal en los embriones (sí lo hace en ELISA). Los otros dos anticuerpos muestran una distribución diferencial de las proteínas, que no se corresponde con lo publicado. Al menos una de las isoformas no codifica para proteína sino que actúa como RNA no codificante.

Objetivo 2

Función de eyg/toe durante las divisiones sincitiales de Drosophila. Se han analizado los embriones pre-blastodérmicos de Drosophila y detectado distribución de la proteína Eyegone/Twin of Eyegone de origen materno. La proteína se acumula en puntos dispersos dentro del núcleo que se intenta identificar. Al eliminar el componente materno de Eyg a los embriones en desarrollo, se producen defectos de segregación cromosómica. Se ha analizado el estado de algunos tipos de cromatina constitutivamente cerrada en estos embriones mutantes (como la región 1360 del cromosoma 4 o la región genómica del rDNA) y se ha comprobado que éstas se encuentran en los mutantes "abiertas" o menos "empaquetadas". Lo mismo parece ocurrir con las regiones teloméricas que en los mutantes están malformadas y dan lugar a fusiones teloméricas que se están estudiando en detalle.

Objetivo 3

Estudio de la diferencia en la cromatina entre los sincitios y los embriones pre-blastodérmicos celulares. Para llevar a cabo este último objetivo se va a inmunoprecipitar cromatina de embriones pre-blastodérmicos y post-blastodérmicos por separado con varios anticuerpos que reconocen modificaciones específicas de histonas y se va a secuenciar y comparar el DNA inmunoprecipitado.