Proyectos de investigación

Las vesículas extracelulares (EV) median la comunicación celular intra- y extra-hepática en la enfermedad del hígado graso no alcohólica (EHGNA). Debido a la relación entre la EHGNA y la diabetes tipo 2, analizamos el efecto de las EVs secretadas por los hepatocitos en condiciones de lipotoxicidad en el páncreas, centrándonos en la inflamación y en la activación de las células estrelladas pancreáticas (PSC).

Métodos: Ratones macho C57BL/6J se alimentaron con dieta estándar (CHD) o alta en grasa (HFD) durante 12-14 semanas. Los EVs se aislaron de: 1) hepatocitos de ratones alimentados con dieta CHD sin (EV^C) o con tratamiento con ácido palmítico (PA) (EV^PA) o PA + TGFβ (EV^P+T), 2) hepatocitos de ratones alimentados con HFD (EV^HFD). Se inyectaron EVs (EVC y EVP, 50 μg) por vía intravenosa (i.v.) en ratones macho C57BL/6J (2 inyecciones/semana durante 3 semanas). Al final del tratamiento, se disgregaron los páncreas y se aislaron las células inmunes pancreáticas que se analizaron mediante citometría de flujo. Se utilizaron EV^P+T para tratar PSC primarias de rata y se analizaron marcadores de activación.

Resultados: El porcentaje de células CD45⁺ aumentó en el páncreas de los ratones inyectados con EVP en comparación con los que recibieron EV^C. El porcentaje de macrófagos residentes en el páncreas (F4/80⁺/CC11b⁺) fue similar en los 2 grupos. Sin embargo, los ratones tratados con EV^P mostraron una disminución de macrófagos polarizados M2 (CD206⁺). En relación a los linfocitos, el porcentaje de células CD3⁺ se elevó significativamente en el páncreas de los ratones inyectados con EVP, efecto corroborado mediante inmunofluorescencia en secciones pancreáticas. Por otro lado, las PSCs primarias de rata respondieron a los estímulos TGFβ (control de activación), EV^P y EV^P+T aumentando los niveles de αSMA y Col1A1. Además, durante este año completamos el estudio del interactoma hepatocito-macrófago mediado por las EVs secretadas por los hepatocitos en condiciones lipotóxicas estimulando macrófagos peritoneales o células de Kupffer (KCs) de ratones WT y TLR4-KO con EV^C o EV^PA. Encontramos una atenuación de las respuestas inflamatorias en los macrófagos/KCs TLR4-KO que recibieron EV^PA.

Conclusión: Las EVs secretadas por los hepatocitos en condiciones de lipotoxicidad actúan en el páncreas e inducen inflamación en el páncreas exocrino, así como la activación de las PSCs.